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        產(chǎn)品中心
        2× KOD PCR Master Mix(含染料)
        簡要描述:

        本產(chǎn)品含紅色示蹤染料,不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進行電泳;也可經(jīng)過純化處理,以用于酶切、連接、測序等后續(xù)操作。
        2× KOD PCR Master Mix(含染料)

        • 產(chǎn)品型號:71517
        • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
        • 更新時間:2025-07-17
        • 訪  問  量:261
        詳情介紹

        2× KOD PCR Master Mix (含染料)

         

        2× KOD PCR Master Mix(含染料)


        目錄號:71517

        產(chǎn)品內(nèi)容

        產(chǎn)品成份

        71517-05

        71517-0100

        2× KOD PCR Master Mix

        5× 1 ml

        100× 1 ml

        保存條件

        -20℃保存,有效期 2 年。經(jīng)常使用,可置于 4 °C 保存,有效期 3 個月。


        具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)


        產(chǎn)品簡介

        本產(chǎn)品包含KOD DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液,濃度為2×。該酶所具有的chao強3’→ 5’外切酶活性使得其保真性比Pfu DNA Polymerase 更高,保真性是Taq DNA Polymerase的80倍,同時具有合成速度快的特點,聚合速度約為普通Pfu DNA Polymerase的5倍,Taq DNAPolymerase的2倍,達到100-138bp/秒,可以在短時間內(nèi)獲得高產(chǎn)量的擴增產(chǎn)物,特別適合于高保真地擴增6kb以內(nèi)的PCR 產(chǎn)物,擴增所得的DNA為平末端,可用于基因克隆、表達及突變分析等分子生物學(xué)實驗。

        KOD擴增的PCR產(chǎn)物為平末端(Blunt),可直接用于Blunt載體克隆(Cat#V116、V117)

        本產(chǎn)品含紅色示蹤染料,不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進行電泳;也可經(jīng)過純化處理,以用于酶切、連接、測序等后續(xù)操作。

        產(chǎn)品特點

        1. 高產(chǎn):產(chǎn)量是普通 Taq 酶的 2 倍!

        2. 高效:延伸速度 100-138bp/sec!

        3. 高成功率:對于高 GC 模板和特殊結(jié)構(gòu)的復(fù)雜模板有良好效果!

         

        2 × KOD PCR Master Mix 使用說明:

        一、配制 PCR 反應(yīng)體系:(于冰上配制)

        Component

        20 μl Reaction

        50 μl Reaction

        終濃度

        2× KOD PCR Master Mix

        10 μl

        25 μl

        1 ×

        Forward Primer(10 μM)

        0.4 μl

        1 μl

        0.2 μM

        Reverse Primer(10 μM)

        0.4 μl

        1 μl

        0.2 μM

        Template DNA

        <0.2 μg

        <0.5 μg

        as required

        ddH2O

        up to 20 μl

        up to 50 μl


        參考模板用量:(以 50 μl 反應(yīng)體系為例)

        質(zhì)粒:0.1-10 ng;

        細菌基因組:10-100 ng;

        人類基因組:50-150 ng;

        cDNA:1-5 μl from RT。

        注意:用 ddH2O 補足反應(yīng)體系(體積)至 50 μl。實際操作中,首先要計算好需要補加 ddH2O 的量以后,建議先加水,然后按上述順序添加其它成分,最后添加 KOD DNA Polymerase。充分混勻后,離心數(shù)秒使反應(yīng)混合物沉到管底,然后將反應(yīng)管置于 PCR 儀中進行擴增。

        二、設(shè)置 PCR 循環(huán)條件:(請根據(jù)實際情況適當(dāng)調(diào)整)

        Step

        Temperature

        Time

        Cycle Number

        Initialdenaturation

        94℃

        3 minutes


        Denaturation

        94℃

        20-30 seconds

        30-35 cycles

        Annealing

        50-60℃

        20-30 seconds

        Extension

        72℃

        1-4kb / minute

        Final Extension

        72℃

        5 minutes



        4-8℃

        Hold


        注意:一般情況下,Annealing Temperature = Tm - 5°C

        如果擴增片段小于 4 kb,建議 KOD 酶的延伸速度為 1kb / 15 sec;

        如果擴增片段大于 4 kb,建議延伸速度為 1kb / 20-30 sec。

        三、結(jié)果檢測:反應(yīng)結(jié)束后取 5 µl 反應(yīng)產(chǎn)物,瓊脂糖凝膠電泳檢測。


        2× KOD PCR Master Mix(含染料)


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