果膠裂解酶（pectinate lyases，PL）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

果膠裂解酶（EC4.2.2.10）是果膠酶的重要組成部分，是一種能降解植物細(xì)胞壁，導(dǎo)致植物組織軟化甚至死亡的解聚酶，來源比較廣泛，主要來源于微生物，可用于果汁、果酒的澄清，提高水果出汁率，植物病毒的純化，紙漿的漂白和紡織品的生物精煉，在減少環(huán)境污染和降低能源消耗方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

測(cè)定原理：

果膠裂解酶作用于果膠中的α-1,4 糖苷鍵，生成在還原端C4 和C5 之間位置具有不飽和鍵的不飽和寡聚半乳糖醛酸，在 235nm 處有特征吸收峰。

果膠裂解酶試劑盒   果膠系列-常備現(xiàn)貨

試劑組成和配制：

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1 ml 石英比色皿、恒溫水浴鍋。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

酶液提取：

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g ，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 10000g， 4℃離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3、培養(yǎng)液：直接測(cè)定。

測(cè)定操作表：

酶活性計(jì)算公式：

1. 組織中PL 活性

（1） 按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：在 40℃，pH5.5 條件下，每毫克蛋白每分鐘分解果膠產(chǎn)生 1nmol 不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL 活性（nmol/min/mg prot）= A÷（ε×d）×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T

= 64.1×A÷Cpr

（2） 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：在 40℃，pH5.5 條件下，每克組織每分鐘分解果膠產(chǎn)生 1nmol 不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL 活性（nmol/min/g 鮮重）= A÷（ε×d）×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T

= 64.1×A÷W

2. 細(xì)胞PL 活性

酶活性定義：在 40℃，pH5.5 條件下，每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘分解果膠產(chǎn)生 1nmol 不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL 活性（nmol/min/104cell）= A÷（ε×d）×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）÷T

= 64.1×A÷細(xì)胞數(shù)量

3. 培養(yǎng)液PL 活性

酶活性定義：在 40℃，pH5.5 條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解果膠產(chǎn)生 1nmol 不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL 活性（nmol/min/ml）= A÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T

= 64.1×A

ε：不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數(shù)：5200L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應(yīng)總體積， 1ml；V 樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.1ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml； W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min

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