磷脂酶D（ Phospholipases D，PLD ）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

磷脂酶 D（EC3.1.4.4）即磷脂酰dan堿水解酶，是催化磷酸二酯鍵水解和堿基交換反應(yīng)的一類酶的總稱，廣泛存在于高等動植物和細(xì)菌等多種生物體中，具有參與細(xì)胞脂質(zhì)代謝、信號傳導(dǎo)、生物膜形成的抗逆境脅等生理功能。

測定原理：

磷脂酶D 催化水解磷脂酰dan堿末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和dan堿，dan堿在dan堿氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過氧化氫，過氧化氫在過氧化氫酶的作用下將 4-氨基安替bi林和重蒸酚氧化成粉紅色物質(zhì)，在 500nm 處有特征吸收峰。

磷脂酶D試劑盒   脂肪酸系列-常備現(xiàn)貨

組成：

試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加 3ml 無水乙醇充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

天平、研缽、超速冷凍離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 ml 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋，無水乙醇。

酶液提取

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 離心 30min，棄上清，取沉淀溶于 1ml 試劑一。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后于 4℃，10000g離心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 離心 30min，棄上清，取沉淀溶于 1ml 試劑一。

3. 血清：直接測定。

測定操作

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