土壤無機(jī)磷（soil inorganic phosphorus，S-PHOS）含量試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

磷是植物必需大量元素。植物主要通過根系從土壤中獲取磷元素。土壤磷包括有機(jī)磷和無機(jī)磷。土壤有機(jī)磷經(jīng)過礦化分解而轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷，才能進(jìn)一步被植物吸收利用。

測(cè)定原理：

從土壤中提取無機(jī)磷，在酸性環(huán)境中，通過鉬藍(lán)法定磷，即可計(jì)算出無機(jī)磷含量。

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試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋 10 倍后再用；

試劑三：粉劑×1 瓶， 4℃避光保存。臨用前配制，加入 20 ml 蒸餾水，充分溶解后加入 10 ml 試劑二，混勻；

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 支，20 μmol/L 無機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式水浴鍋，分析天平、可調(diào)式移液器、1ml 玻璃比色皿、蒸餾水和 100 目篩子。

土壤無機(jī)磷提取：

取 10 ml 離心管，加入精確稱取的 100 目篩子過篩的風(fēng)干土樣約 0.1g，加入 10 ml 提取液，震蕩混勻，然后置于 40℃水浴浸提 1 h，8000g，25℃，離心 10min，取上清液，待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 打開水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到 40℃。

3. 空白管：取EP 管，依次加入 500μl 蒸餾水，500μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為A 空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP 管，依次加入 50μl 標(biāo)準(zhǔn)液，450μl 蒸餾水，500μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為A 標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 測(cè)定管：取EP 管，依次加入 50μl 上清液，450μl 蒸餾水，500μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為A 測(cè)定管。

需在 40min 內(nèi)完成比色。

土壤無機(jī)磷含量計(jì)算公式：

S-PHOS（nmol/d /g 干重）= [C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 總÷W

= 200×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：20 μ mol/L；V 總：總上清液體積，10 ml=0.01 L；W：土壤樣品質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

2、試劑三需臨用前配制，限當(dāng)天使用。試劑三配制過程中，可能會(huì)產(chǎn)生黑色固體，其不影響結(jié)果，注意吸取時(shí)不要將黑色固體吸入。

3、40min 內(nèi)完成比色。

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