土壤酸性磷酸酶（soil acid phosphatase，S-ACP）活性測定試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

土壤磷酸酶是一類催化土壤有機磷礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉化及其生物有效性，是評價土壤磷素生物轉化方向與強度的指標。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH 顯著影響，根據最適 pH 范圍，通常分為酸性、中性和堿性三種類型。

測定原理：

酸性環境中，S-ACP 催化磷酸苯二鈉水解生成ben酚和磷酸氫er鈉，通過測定酚的生成量即可計算出S-ACP活性。

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試劑組成和配制：

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。用前加 50ml 蒸餾水充分溶解。

試劑四：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加 1152μl 無水乙醇（自備），48 μl 蒸餾水充分溶解。（變褐色后不能再使用）。

標準品：液體×1 瓶，0.5 μmol/ml ben酚標準液，4℃保存。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

自備儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、37℃恒溫培養箱、分析天平、可調式移液器、1ml 玻璃比色皿、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。

粗酶液提取：

稱取風干混勻土壤約 0.1g，加入 50μl 甲苯（自備），輕搖 15min；加 0.4 ml 試劑一并且搖勻后，置于37℃恒溫培養箱，開始計時，催化反應 24h；到時后迅速加入 1ml 試劑二充分混勻，以終止酶催化的反應。8000g，25℃離心 10min，取上清液置于冰上待測。

測定步驟：

1. 分光光度計預熱 30 min，調節波長到 660 nm，蒸餾水調零。

2. 空白管：取 1ml 玻璃比色皿，加入 50 μl 蒸餾水，100 μl 試劑三，20 μl 試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水 830 μl，混勻后 25℃靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度，記為A 空白管。

3. 標準管：取 1ml 玻璃比色皿，加入 50 μl 標準液，100 μl 試劑三，20 μl 試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水 830 μl，混勻后 25℃靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度，記為A 標準管。

4. 測定管：取 1ml 玻璃比色皿，加入 50 μl 上清液，100 μl 試劑三，20 μl 試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水 830 μl，混勻后 25℃靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度，記為A 測定管。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

S-ACP 活性計算公式：

活性單位定義：37℃中每克土壤每天釋放 1μmol 酚為 1 個酶活單位。

S-ACP（μmol/d /g 土樣）=[C 標準液×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)]×V 總÷W÷T

=0.725×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)÷W

C 標準液：0.5 μ mol/ml； V 總：催化體系總體積，1.45ml；W：土壤樣品質量，g；T：催化反應時間，24 h=1 d。

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