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產(chǎn)品型號：P4922廠商性質(zhì)：經(jīng)銷商更新時間：2025-07-15訪 問 量：140諾博萊德 高爾基體膜蛋白提取試劑盒
高爾基體膜蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨
產(chǎn)品貨號：P4922
產(chǎn)品名稱：高爾基體膜蛋白提取試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T
產(chǎn)品簡介：
中文名稱：高爾基體膜蛋白提取試劑盒
規(guī)格：50T ; 100T
儲存條件：2-8℃，1 year
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)
NobleRyder P4922 高爾基體膜蛋白提取試劑盒
適用樣本
動物細(xì)胞/組織
產(chǎn)品介紹
高爾基體膜蛋白提取試劑盒可用于各種動物細(xì)胞和實體軟、硬組織樣本的高爾基體膜蛋白的提取。
本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性 分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。
本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。
本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。
注：
1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3. 試劑拆封后請盡快使用完！
產(chǎn)品簡介：
高爾基體膜蛋白提取試劑盒可用于各種動物細(xì)胞和實體軟、硬組織樣本的高爾基體膜蛋白的提取。
本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。
本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。
本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容
自備試劑和儀器
離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套
產(chǎn)品特點：
1、使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
2、提取過程簡單方便。
3、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
5、總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。
6、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種立的蛋白酶抑制劑 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、PepstatinA、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
使用方法：
一、使用注意事項：
1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預(yù)實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得優(yōu)良實驗效果
2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
3. 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
4. 最好使用Dounce勻漿器勻漿，如果沒有Dounce勻漿器，也可用普通玻璃勻漿器勻漿，但是高爾基體蛋白回收率會下降。
5. 用Dounce勻漿器勻漿是高爾基體膜蛋白提取的關(guān)鍵的步驟，故勻漿前最好先通過預(yù)實驗確定不同組織樣本的最適勻漿次數(shù)，方法是每勻漿5-10次后，取2-3μl勻漿液到載玻片上，然后在相差顯微鏡下觀察，完整細(xì)胞數(shù)量降低到20%以下為佳。此鏡檢步驟非必須步驟，但是會影響高爾基體膜蛋白的回收率。在樣本極難獲取的實驗中，務(wù)必做鏡檢。
6. 提取液C在使用前須一直置于2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時會導(dǎo)致不容易分層。
7. 膜蛋白電泳時loading buffer應(yīng)該避免煮沸。
8. 膜蛋白電泳時可以提高loading buffer的SDS含量。
9. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
10. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
二、操作步驟
提取液準(zhǔn)備：
每200ul冷的蛋白提取液C中加入1ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
每200ul冷的蛋白提取液D中加入1ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
細(xì)胞高爾基體膜蛋白提取
1.取1—2×107個細(xì)胞，在4℃，500×g條件下離心2-3分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。
2.用冷PBS洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
3.加入500ul冷的試劑A，置冰上10分鐘。
4.用Dounce勻漿器勻漿充分勻漿。
5.然后在4℃，1000×g力條件下離心5分鐘。
6.棄沉淀，將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。
7.在4℃，3000×g力條件下離心10分鐘。
8.棄沉淀，將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。
9.在4℃，10000×g力條件下離心10分鐘。
10.棄沉淀，將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。
11.在4℃，25000×g力條件下離心30分鐘。棄上清。
12.在沉淀中加入400ul冷的試劑B，混勻。
13.在4℃，25000×g力條件下離心30分鐘。
14.棄上清，沉淀中加入100-200ul冷的蛋白提取液C，充分混勻。
15.在2-8℃條件下振蕩30-40分鐘，至沉淀充分裂解，無明顯沉淀。
16.在4℃，12000×g條件下離心5分鐘。棄沉淀，收集上清。
17.將上清吸入另一干凈離心管，在37℃水浴10分鐘。
18.在37℃，1000×g力離心5分鐘，此時溶液分為兩層，下層是膜蛋白約為20-30ul。
19.小心移除上層液體，收集上層部分留作備用分析。
20.用50-100ul冷的試劑D膜蛋白溶解液溶解下層高爾基體膜蛋白部分，即得高爾基體膜蛋白。
21.將高爾基體膜蛋白樣品，置冰箱備用或直接用于下游實驗。
組織高爾基體膜蛋白提取：
1.取50-100mg新鮮動物組織樣本，用PBS洗滌干凈。
2.用剪刀盡可能剪碎，用冷PBS洗滌兩次。
3.加入500ul冷的試劑A，置冰上10分鐘。
4.用Dounce勻漿器充分勻漿30-40下，至無明顯固體團塊。
5.然后在4℃，1000×g力條件下離心5分鐘。
6.棄沉淀，將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。
7.在4℃，3000×g力條件下離心10分鐘。
8.棄沉淀，將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。
9.在4℃，10000×g力條件下離心10分鐘。
10.棄沉淀，將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。
11.在4℃，25000×g力條件下離心30分鐘。棄上清。
12.在沉淀中加入400ul冷的試劑B，混勻。
13.在4℃，25000×g力條件下離心30分鐘。
14.棄上清，沉淀中加入100-200ul冷的蛋白提取液C，充分混勻。
15.在4℃條件下振蕩30-40分鐘，至沉淀充分裂解，無明顯沉淀。
16.在4℃，12000×g條件下離心5分鐘。棄沉淀，收集上清。
17.將上清吸入另一干凈離心管，在37℃水浴10分鐘。
18.在37℃，1000×g力離心5分鐘，此時溶液分為兩層，下層是膜蛋白約為20-30ul。
19.小心移除上層液體，收集上層部分留作備用分析。
20.用50-100ul冷的試劑D膜蛋白溶解液溶解下層高爾基體膜蛋白部分，即得高爾基體膜蛋白。
21.將高爾基體膜蛋白樣品，置冰箱備用或直接用于下游實驗。
注：
①蛋白濃度低？
處理部分樣本時可能沒有裂解wan全，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑C的處理時間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
②用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
③提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。
注意事項：
1. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。
2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。
3. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。
4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
高爾基體膜蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨
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P4922 高爾基體膜蛋白提取試劑盒 50T/100T
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