該酶催化雙鏈 DNA 或 RNA 上相鄰的 5′-磷酸末端和 3′-羥基末端形成磷酸二酯鍵。該酶不僅能夠催化平齊末端或粘性末端之間的連接，還可以修復雙鏈 DNA、RNA 或 DNA/RNA 雜交雙鏈中的單鏈切刻。
T4 DNA 連接酶 T4 DNA ligase 核酸檢測

諾博萊德  T4 DNA 連接酶 T4 DNA ligase

T4 DNA 連接酶 T4 DNA ligase   核酸檢測

產品貨號：T9298

產品名稱：T4 DNA 連接酶 T4 DNA ligase

英文名稱：T4 DNA ligase

產品別名：T4 DNA連接試劑盒

產品規格：60U

產品簡介：

儲存條件：Store at -20℃

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyderT9298  T4 DNA 連接酶 T4 DNA ligase特性：

高效連接粘性末端和平末端

T/A 克隆

dsDNA 切刻修復

構建高豐度克隆文庫

RNA 和 DNA 的連接

概述：

該酶催化雙鏈 DNA 或 RNA 上相鄰的 5′-磷酸末端和 3′-羥基末端形成磷酸二酯鍵。該酶不僅能夠催化平齊末端或粘性末端之間的連接，還可以修復雙鏈 DNA、RNA 或 DNA/RNA 雜交雙鏈中的單鏈切刻。

來源：

純化自 E. coli C600 pcl857 pPLc28 lig8。

反應條件：

1X T4 DNA 連接酶反應緩沖液

[50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM MgCl2，10 mM DTT，1 mM ATP]。推薦 DNA 5′ 末端濃度為 0.1-1.0 μM，16℃ 溫育。

熱失活：65℃ 10 分鐘。

單位定義（粘性末端活性單位）：

1 單位指在 20 μl 1X T4 DNA 連接酶反應緩沖液中，16℃ 反應條件下，30 分鐘能使 50% 的經 HindⅢ 消化的λDNA 片段 [ 5′ 端濃度為 0.12 μM（300 μg/ml）] 連接所需的酶量。

注意事項：

與 E. coli DNA 連接酶需要 NAD+ 作輔因子不同，T4 DNA 連接酶的輔因子是 ATP。

稀釋后的 T4 DNA 連接酶應于 -20℃、50% 甘油貯存緩沖液（稀釋緩沖液 A，NEB #B8001）中保存。如稀釋后馬上使用，也可用 1X T4 DNA 連接酶反應緩沖液稀釋。

只要在反應體系中補加 1 mM ATP，連接反應就可以在 NEB 提供的四種限制性內切酶緩沖液或在T4 DNA 多聚核苷酸激酶反應緩沖液中進行。

使用示例：

1、先將 10×T4DNALigaseBuffer 在冰上融化，并進行短暫的離心。

2、以 20μL 連接體系示例，在無菌微量離心管中加入以下各種成分：

【注】：平末端載體與DNA片段進行連接時，應先將載體進行去磷酸化處理，以防發生自連接現象。為提高連接效率，每20µL反應體系中可以加2µL50%PEG4000。

3、16℃連接過夜。

4、轉化實驗

1）將連接產物加入到100µL 感受態細胞中（連接產物不應超過感受態細胞的1/10），輕彈混勻，冰上孵育30min。

2）將離心管于42℃，熱激90sec（不要晃動），之后立刻置于冰水浴靜置2-3min。

3）向離心管中加入900µLLB或SOC培養基，37℃，150rpm，振蕩培養45min，該過程使菌體復蘇，抗性基因表達。

4）2500 g 離心5min，吸去900µL上清，用剩余培養基重懸菌體，用無菌涂布棒將剩余菌體在正確抗性的平板上涂布均勻，待菌液被平板吸收后，37℃倒置培養過夜。

【注】：如果使用超級感受態細胞（轉化效率＞108cfu/µg），可直接吸取100-200µL37℃孵育后的菌液涂板，剩余菌液可在4℃保存，1周內均可重新涂板。

注意事項：

1、10×T4DNALigaseBuffer 中含有 ATP，為避免 ATP 的降解，建議解凍后分裝凍存于-20℃。

10×T4 DNA Ligase Buffer 在融解時，如果出現少量沉淀屬正常現象，請顛倒混勻后使用。

2、平末端的載體與 DNA 片段連接時，應首先對載體進行去磷酸化，以防止載體自身環化。

注意：如果向反應體系中加入 PEG 可以促進平末端的連接，但 PEG 可能導致cDNA 片段克隆產物 出現串聯體并抑制包裝的反應。

3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

4、本產品僅作科研用途！

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產品訂購信息

T9298  T4 DNA 連接酶 T4 DNA ligase  60U